Efficacy of some avian influenza H5 vaccines against local highly pathogenic avian influenza viruses subtype H5N8 isolated in 2018 and 2020 in Egypt

Commercial inactivated avian influenza H5 vaccine is used as an essential control strategy for avian influenza disease in Egypt. Since the initial outbreaks of highly pathogenic avian influenza H5N8, the virus has diverged with new genotypes and variant viruses continuing to emerge which mainly stand behind vaccination failure. In the present work, four different commercial avian influenza vaccines were inoculated in specific pathogenic free chickens for assessing its efficacy against local highly pathogenic avian influenza H5N8 virus isolated in 2018 and 2020. Two hundred and forty specific pathogenic free chickens were clustered into four groups; each group was inoculated with the corresponding vaccine (60 specific pathogenic free chickens/vaccine). Sixty specific pathogenic free chicks were kept as control unvaccinated group. Sera collected from vaccinated chicken groups at 3rd and 4th week post vaccination were examined for calculating neutralizing antibodies using heterologous highly pathogenic avian influenza H5N8 2018 and 2020. At 4th week post vaccination, vaccinated chickens were challenged; moreover, oropharyngeal swabs were collected from challenged vaccinated chickens to calculate the viral shedding. Our findings revealed the groups vaccinated with vaccine code no 1 and 2 that contains two vaccine strains (H5N1 and H5N8) of local origin exhibited the highest hemagglutination inhibition titer, protection (percent) and reduction in viral shedding titer when examined by highly pathogenic avian influenza H5N8 2018 while, vaccine code no 3 induced lower antibody response, protection (percent) and reduction in viral shedding, but still within satisfactory level when compared to previous groups. When highly pathogenic avian influenza H5N8 2020 was used, it was found the seroconversion rate, protection (percent) and mean titer of reduction of viral shedding decreased in comparison to those recorded for highly pathogenic avian influenza H5N8 2018. Vaccine code no 4 was impotent to either highly pathogenic avian influenza 2018 or 2020. Accordingly, it was recommended to update vaccine strain according to epidemiological condition and used the predominant circulating strain isolate in challenge test(AU)

La vacuna comercial inactivada H5 se utiliza como estrategia esencial de control de la enfermedad de la gripe aviar en Egipto. Desde los brotes iniciales de la gripe aviar altamente patógena H5N8, el virus ha variado al aparecer continuamente nuevos genotipos y variantes virales, que son los principales responsables del fracaso de la vacunación. En el presente trabajo, cuatro vacunas comerciales diferentes contra la gripe aviar se inocularon en pollos libres de patógenos específicos para evaluar su eficacia contra cepas del virus local de la gripe aviar altamente patógeno H5N8 aisladas en 2018 y 2020. Se agruparon 240 pollos pollos libres de patógenos específicos en cuatro grupos, cada uno fue inoculado con la vacuna correspondiente (60 pollos pollos libres de patógenos específicos/vacuna). Sesenta pollos SPF se mantuvieron como grupo control sin vacunar. Los sueros de los pollos vacunados recogidos en la 3ª y 4ª semana después de la vacunación se examinaron para calcular los anticuerpos neutralizantes contra la gripe aviar heteróloga H5N8 2018 y 2020. En la cuarta semana después de la vacunación, los pollos vacunados fueron retados; además, se recogieron hisopados orofaríngeos de los pollos vacunados retados para calcular la diseminación viral. Nuestros resultados revelaron que los grupos vacunados con las vacunas con códigos nº 1 y 2, que contienen dos cepas vacunales (H5N1 y H5N8) de origen local, mostraron el mayor título de inhibición de la hemaglutinación, protección (por ciento) y reducción del título de excreción viral cuando se evaluaron contra la gripe aviar altamente patógena H5N8 2018, mientras que la vacuna con código nº 3 indujo menor respuesta de anticuerpos, protección (por ciento) y reducción de la excreción viral, pero todavía dentro de un nivel satisfactorio en comparación con los grupos anteriores. Al utilizar la vacuna contra la gripe aviar altamente patógena H5N8 2020, se observó que la tasa de seronconversión, la protección (por ciento) y el título medio de reducción de la excreción viral disminuyeron en comparación con los registrados para la gripe aviar altamente patógena H5N8 2018. La vacuna con código nº 4 no fue potente para la gripe aviar altamente patógena de 2018 o de 2020. Por consiguiente, se recomendó actualizar la cepa de la vacuna de acuerdo con las condiciones epidemiológicas y utilizar el aislamiento de la cepa circulante predominante en la prueba de reto(AU)

Alternative method for the evaluation of monovalent inactivated foot and mouth disease virus vaccine

Foot and mouth disease is a highly contagious viral disease of cloven-hoofed animals that has a significant economic impact on livestock. A recent outbreak was detected and recorded as exotic strain of foot and mouth disease virus SAT2 (Serotype SAT2, topotype VII, Lib-12 lineage). The emergency vaccine was produced and assessed in vivo and large number of vaccine batches were urgently needed. The present work was aimed to provide a rapid evaluation of inactivated foot and mouth disease SAT2 oily vaccine to exclude the unsatisfactory batches during emergency circumstances and to reduce time, effort and cost. The extraction of foot and mouth disease antigen content from oily adjuvanted vaccine was carried out using isopropyl myristate and benzyl alcohol methods. The extracted viral antigen was identified by foot and mouse disease serotyping ELISA and 146S content was quantified using sucrose density gradient analysis. Evaluations were carried out instantly and at 2h, 6h and 24h. The results indicated the efficiency of benzyl alcohol to breakdown the oil emulsion either MONTANIDE™ ISA 206 VG or MONTANIDE™ ISA 50 V2, while the isopropyl myristate was efficient for MONTANIDE™ ISA 50 V2 only. The identification and quantification of 146S for extracted antigen using benzyl alcohol indicated significant stable records at different time intervals for the vaccine batches, while the extraction using isopropyl myristate indicated unstable records at different time intervals. It was concluded that the evaluation of monovalent foot and mouse disease vaccine could be conducted in vitro, using serotyping ELISA and quantification of 146S for the extracted antigen, either using benzyl alcohol or isopropyl myristate (MONTANIDE™ ISA50 V2 only), with the consideration that 146S content should not less than 4 μg/mL(AU)

La fiebre aftosa es una enfermedad viral altamente contagiosa de los animales de pezuña hendida que tiene un impacto económico significativo en el ganado. Se detectó un brote reciente que se registró como causado por una cepa exótica del virus de la fiebre aftosa (serotipo SAT2, topotipo VII, linaje Lib-12). La vacuna de emergencia se elaboró y evaluó in vivo, existiendo una urgente necesidad de contar con un gran número de lotes de la misma. El presente trabajo tuvo como objetivo proporcionar una evaluación rápida de la vacuna oleosa inactivada (SAT2) contra la fiebre aftosa, para excluir los lotes insatisfactorios durante circunstancias de emergencia, reduciendo tiempo, esfuerzo y costo. La extracción del contenido de antígeno de fiebre aftosa, de la vacuna oleosa adyuvada, se llevó a cabo utilizando miristato de isopropilo y alcohol bencílico. El antígeno viral extraído se identificó utilizando un ELISA de serotipificación y se cuantificó el contenido de 146S mediante análisis de gradiente de densidad de sacarosa. Las evaluaciones se realizaron de forma instantánea y a las 2h, 6h y 24h. Los resultados indicaron la eficacia del alcohol bencílico para separar la emulsión de aceite para MONTANIDE ™ ISA 206 VG o MONTANIDE™ ISA 50 V2, mientras que el miristato de isopropilo fue eficaz para MONTANIDE™ ISA 50 V2 únicamente(AU)

Eficacia protectora de una vacuna inactivada contra el virus de la enfermedad hemorrágica del conejo tipo 2 preparada a partir de un aislado local en Egipto / Protective efficacy of an inactivated vaccine against Rabbit hemorrhagic disease virus 2 prepared from a local isolate in Egypt

Rabbit hemorrhagic disease is a contagious viral disease of rabbits controlled by vaccination. The present study was aimed to diagnose rabbit hemorrhagic disease from 11 infected farms from Qalubia governorate during 2019 and to prepare homologous vaccine against rabbit hemorrhagic disease virus 2. For this purpose, 11 liver samples were collected from suspected cases and subjected to detection and identification of circulating rabbit hemorrhagic disease virus. Ten samples were confirmed to be rabbit hemorrhagic disease virus using hemagglutination test, animal inoculation and reverse transcriptase polymerase chain reaction. Sequencing and phylogenetic analysis of two isolates (R5&R6) revealed the presence of rabbit hemorrhagic disease virus 2 (A/Qalubia/2019 and B/Qalubia/2019) under accession number MT07629 and MT067630 respectively. The inactivated rabbit hemorrhagic disease virus vaccines were prepared using Montanide ISA 206 oil or aluminum hydroxide gel adjuvants. Prepared vaccines were inoculated subcutaneously in susceptible rabbits and submitted to sterility, safety and potency tests. Obtained results showed that mean hemagglutination inhibition titer for aluminum hydroxide gel vaccine was 6,7.7,8.9 and 9.1 log2 while, Montanide vaccine reached to 6.7,8.7,9.2 and 9.5 log2 at 1st, 2nd, 3rd, and 4th weeks post vaccination, respectively. Immunized rabbits with Montanide vaccine showed better protection reach to 70 percent, 90 percent percent, 100 percent and 100 percent when compared to aluminum hydroxide gel vaccine 60 percent, 70 percent, 90 percent and 90 percent at 1st, 2nd, 3rd and 4th weeks post vaccination respectively. It was concluded that newly emerged rabbit hemorrhagic disease virus 2 was isolated from suspected cases. The two prepared vaccines were sterile, safe and potent. The oily adjuvanted rabbit hemorrhagic disease virus 2 vaccine stimulated an earlier and higher humoral immune response than the aluminum hydroxide gel adjuvanted vaccine. This humoral immune response achieved significant level of protection(AU)

La enfermedad hemorrágica del conejo es una enfermedad viral contagiosa de los conejos que se controla mediante vacunación. El presente estudio tuvo como objetivo diagnosticar la enfermedad hemorrágica del conejo en 11 granjas infectadas de la provincia de Qalubia, durante 2019 y preparar una vacuna homóloga contra el virus de la enfermedad hemorrágica del conejo tipo 2. Para este propósito, se recolectaron 11 muestras de hígado de casos sospechosos y se sometieron a detección e identificación de virus circulante de la enfermedad hemorrágica del conejo. Se confirmó que diez muestras eran positivas al virus de la enfermedad hemorrágica del conejo, utilizando para ello la prueba de hemaglutinación, inoculación en animales y Reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa. La secuenciación y el análisis filogenético de dos aislamientos (R5 y R6) revelaron la presencia del virus de la enfermedad hemorrágica del conejo tipo 2 (A/Qalubia/2019 y B/Qalubia/2019) con los números de acceso MT07629 y MT067630 respectivamente. Las vacunas inactivadas del virus de la enfermedad hemorrágica del conejo se prepararon usando adyuvantes de gel de hidróxido de aluminio o aceite Montanide ISA 206. Las vacunas preparadas se inocularon por vía subcutánea en conejos susceptibles y se sometieron a pruebas de esterilidad, seguridad y potencia. Los resultados obtenidos mostraron que el título medio de inhibición de la hemaglutinación para la vacuna en gel de hidróxido de aluminio fue de 6; 7,7; 8,9 y 9,1 log2, mientras que la vacuna de Montanide alcanzó 6,7; 8,7; 9,2 y 9,5 log2 en la 1ª, 2ª, 3ª y 4ª semanas después de la vacunación, respectivamente. Los conejos inmunizados con la vacuna Montanide tuvieron una mejor protección, alcanzándose niveles de 70 por ciento, 90 por ciento, 100 por ciento y 100 por ciento en comparación con la vacuna en gel de hidróxido de aluminio 60 por ciento, 70 por ciento, 90 por ciento y 90 por ciento en la 1ª, 2ª, 3ª y 4ª semanas después de la vacunación, respectivamente. Se concluyó que el virus de la enfermedad hemorrágica del conejo tipo 2 de reciente aparición se aisló de los casos sospechosos. Las dos vacunas preparadas fueron estériles, seguras y potentes. La vacuna contra el virus de la enfermedad hemorrágica del conejo tipo 2 con adyuvante oleoso estimuló una respuesta inmune humoral más temprana y mayor que la vacuna con adyuvante en gel de hidróxido de aluminio. Esta respuesta inmune humoral confirió un nivel significativo de protección(AU)

The effect of Spirulina algae on the immune response of SPF chickens to commercial inactivated Newcastle vaccine in poultry / El efecto del alga Spirulina sobre la respuesta inmune de pollos SPF inducida por la vacuna inactivada comercial contra la enfermedad de Newcastle

The objective of this study was to investigate the effects of Spirulina platensis (SP) powder supplementation on immune response in SPF chickens. For this purpose, 120 SPF chicks were randomly clustered into six groups consisting of 20 birds each which assigned to five groups vaccinated by commercial inactivated Newcastle disease (ND) vaccine at 21 days of age. The four groups were supplemented with 0.5, 1, 1.5 and 2 g of SP per kg of ration at 7 day of age and other group as control treatment group. Control unvaccinated group still without any treatment. Individual blood samples were collected weekly from all groups, and NDV-HI antibodies were measured using Hemagglutination inhibition (HI) test. After 28 days post-vaccination, ten birds from all groups were challenged intramuscularly at a dose 0.5 mL/bird containing 106 EID50 of local NDV genotype VII. Challenge virus shedding was detected using real time qrt-PCR of oropharyngeal swabs that were collected from all challenged chicken groups of at 3, 5, 7 and 10 days post challenge. Obtained results showed that vaccinated groups of SPF-chickens either supplied with Spirulina or control treatment group induced positive serological response as NDV-HI antibody were measured in sera of immunized chicks (7.6, 8, 8.3, 8.9 and 7.4 log2, respectively) at 4 weeks post vaccination (WPV). Significant differences were observed at 2 WPV in the vaccinated SPF chickens consumed 1, 1.5 and 2 g of SP/kg of ration, compared to untreated vaccinated group (p<0.05). Immunized SPF chickens supplied with different SP concentration confer satisfactory protection against heterologous challenge virus (90 percent, 100 percent, 100 percent and 100 percent respectively), in contrast to untreated vaccinated chickens. Different percentages of reduction of viral shedding (55 percent, 65 percent, 76 percent and 87 percent) of treated vaccinated chickens with different concentration of SP were detected, despite untreated group were reduced 46 percent from total viral shedding. These findings suggest that dietary Spirulina has immune-stimulatory effects on the immune system of SPF chickens. One gram from SP per kg of ration was minimum recommended concentration that able to exhibit optimum immune response, increase protection against heterologous strains and able to reduce viral shedding(AU)

El objetivo de este estudio fue investigar los efectos de la suplementación con polvo de Spirulina platensis (SP) sobre la respuesta inmune en pollos SPF. Para este propósito se agruparon al azar 120 polluelos SPF en seis grupos de 20 aves cada uno, que se asignaron a cinco grupos vacunados con la vacuna comercial inactivada contra la enfermedad de Newcastle (ND) a los 21 días de edad. Cuatro grupos se suplementaron con 0,5; 1; 1,5 y 2 g de SP por kg de ración a los 7 días de edad, un grupo vacunado sin suplemento y un grupo sin ningún tratamiento. Semanalmente, se recogieron muestras de sangre individuales de todos los grupos y se midieron los anticuerpos hemaglutinantes contra el virus Newcastle (NDV-HI) mediante la prueba de inhibición de la hemaglutinación (HI). 28 días después de la vacunación, fueron retadas diez aves de cada grupo por vía intramuscular a una dosis 106 EID50 del genotipo VII del NDV local en un volumen de 0,5 mL/ave. Se detectó la eliminación del virus mediante qrt-PCR en hisopos orofaríngeos que se recolectaron en todos los grupos a los 3, 5, 7 y 10 días después del reto. Los resultados obtenidos mostraron que los grupos vacunados de pollos y suplementados con Espirulina y el grupo de control vacunado, indujeron una respuesta serológica positiva cuando se determinaron los anticuerpos NDV-HI en los pollitos inmunizados (7,6; 8; 8,3; 8,9 y 7,4 log2 respectivamente) a las 4 semanas después de la vacunación (SPV). Se observaron diferencias significativas a las 2 SPV en los pollos vacunados que consumieron 1, 1,5 y 2 g de SP/kg de ración, en comparación con el grupo vacunado no tratado (p<0,05). Los pollos inmunizados que recibieron diferentes concentraciones de SP mostraron una protección satisfactoria contra el desafío heterólogo viral (90 por ciento, 100 por ciento y 100 por ciento respectivamente), en contraste con los pollos vacunados no tratados. Se observaron diferentes porcentajes de reducción de la diseminación viral (55 por ciento, 76 por ciento y 87 por ciento) entre los pollos vacunados tratados con diferente concentración de SP. En el grupo no tratado se redujo al 46 por ciento. Estos hallazgos sugieren que la Espirulina en la dieta tiene efectos inmunoestimuladores sobre el sistema inmunitario de los pollos. Un gramo de SP por kg de ración fue la concentración mínima recomendada para una respuesta inmune óptima, y de esta forma aumentar la protección contra las cepas heterólogas y disminuir la diseminación viral(AU)